I dette nye kapittelet i den storslåtte sagaen, basert på Frank Millers grafiske novelle Xerxes, og fortalt i samme imponerende visuelle stil som kassasuksessen "300", forflyttes handlingen til en ny "slagmark" - havet - idet den greske generalen Themistokles forsøker å forene hele Hellas og tar styringen for å forandre krigens kurs. "300: Rise of an Empire" handler om Themistokles sin kamp mot massive persiske invasjonsstyker ledet av guden Xerxes og Artemisia, den hevnlystne kommandanten av den persiske marine.